| IPTG長期供貨 |
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價格：1 元(人民幣) | 產地：湖北武漢市 |
| 最少起訂量：1千克 | 發貨地：湖北武漢市 | |
| 上架時間：2026-04-22 08:37:54 | 瀏覽量：47 | |
湖北貓爾沃生物醫藥有限公司
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| 經營模式：生產加工 | 公司類型：私營有限責任公司 | |
| 所屬行業：原料藥 | 主要客戶： | |
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實驗方案
1、外源基因的誘導表達：(1)用適當的限制性內切核酸酶消化載體DNA和目的基因.(2)按連接步驟連接目的基因和載體,并轉化到相應的宿主菌.(3)篩選出含重組子的轉化菌落,提取質粒DNA作限制性內切核酸酶圖譜,DNA序列測定,確定無誤后進行下一步.(4)如果表達載體的原核啟動子為PL啟動子,則在30-32℃培養數小時,使培養液的OD600達0.4-0.6,迅速使溫度升至42℃繼續培養3-5h;如果表達載體的原核啟動子為tac等,則37℃培養細菌數小時達到對數生長期后加IPTG至終濃度為1mmol/L.繼續培養3-5h.(5)取上述培養液1mL,1000g離心,1min,沉淀,加100μL聚丙烯Chemicalbook酰胺凝膠電泳上樣緩沖液后,作SDS-PAGE檢測.
2、大腸桿菌包涵體的分離與蛋白質純化：細菌的裂解常用方法有：①高溫珠磨法;②高壓勻漿;③超聲破碎法;④酶溶法;⑤化學滲透等.前三種方法屬機械破碎法,并且方法①、②已在工業生產中得到應用,后三種方法在實驗室研究中應用較為廣泛.下面介紹酶溶法和超聲破碎法的實驗步驟.酶溶法.常用的溶解酶有溶菌酶;β-1,3-葡聚糖酶;β-1,6-葡聚糖酶;蛋白酶;殼多糖酶;糖昔酶等.溶菌酶主要對細菌類有作用,而其他幾種酶對酵母作用顯著.主要步驟為：4℃,5000rpm離心,15min,收集誘導表達的細菌培養液(100mL).棄上清,約每克濕菌加3mL裂解緩沖液,懸浮沉淀.
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