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韶關高效過濾器：冷卻水、冷凝水中嗜肺軍團菌檢驗方法本附錄規(guī)定了集中空調通風系統(tǒng)冷卻水、冷凝水及其形成的沉積物、軟泥等樣品中嗜肺軍團菌的檢驗方法。
A1原理
待測水樣經過濾膜或離心濃縮后，中效過濾器一部分樣品經酸處理與熱處理，以減少雜菌生長，一部分樣品不作處理。將上述處理與未處理樣品分別接種BCYE瓊脂平板并進行培養(yǎng)，生成典型菌落并經生化培養(yǎng)和血清學實驗鑒定確認則判定為嗜肺軍團菌。
A2主要儀器設備
A2.1平皿：90mm
A2.2培養(yǎng)箱：35~37℃
A2.3紫外燈：波長360±2nm
A2.4濾膜濾器
A2.5濾膜：孔徑0.22～0.45μm
A2.6蠕動泵
A2.7離心機
A2.8渦旋振蕩器
A2.9普通光學顯微鏡、熒光顯微鏡、體式鏡
A2.10水浴箱
A3采樣中效過濾器
A3.1采樣容器：可選擇玻璃瓶或聚乙烯瓶，沉積物與軟泥需用廣口瓶，容器均需螺口或磨口，用前滅菌。
A3.2采樣量：每個采樣點依無菌操作取水樣（或沉積物、軟泥等樣品）約200ml。
A3.3中和：經氯或臭氧等消毒的樣品，采樣容器滅菌前加入硫代硫酸鈉溶液以中和樣品中的氧化物。
A3.4樣品運輸與貯存：樣品最好2天內送達實驗室，不必冷凍，但要避光和防止受熱，室溫下貯存不得超過15天。

A4 中效過濾器方法與步驟
A4.1樣品處理
A4.1.1沉淀或離心：如有雜質可靜置沉淀或1000r/min離心1min去除。
A4.1.2過濾：將經沉淀或離心的樣品通過孔徑0.22～0.45μm濾膜過濾，取下濾膜置于15ml滅菌水中，充分洗脫，備用。www.rfilter.com
A4.1.3熱處理：取1ml洗脫樣品置50℃水浴加熱30min。
A4.1.4酸處理：取5ml洗脫樣品，調pH至2.2，輕輕搖勻，放置5min。
A4.2接種與培養(yǎng)：取A4.1.2洗脫樣品、A4.1.3熱處理樣品及A4.1.4酸處理樣品各0.1ml，分別接種GVPC平板。將接種平板靜置于CO2培養(yǎng)箱中，溫度為35~37℃，CO2濃度為2.5。無CO2培養(yǎng)箱可采用燭缸培養(yǎng)法。觀察到有培養(yǎng)物生成時，反轉平板，孵育10天，注意保濕。
A4.3觀察結果：軍團菌生長緩慢，易被其它菌掩蓋，需每天在體式鏡上觀察。軍團菌的菌落顏色多樣，通常呈白色、灰色、藍色或紫色，也能顯深褐色、灰綠色、深紅色；菌落整齊，表面光滑，呈典型毛玻璃狀，在紫外燈下，有熒光。

A4.4菌落驗證：中效過濾器從每一個平皿上挑取2個可疑菌落，接種BCYE和L－半光氨酸缺失的BCYE瓊脂平板，35~37℃培養(yǎng)2天，凡在BCYE瓊脂平板上生長而在L－半光氨酸缺失的BCYE瓊脂平板不生長的則為軍團菌菌落。
A4.5嗜肺軍團菌型別的確定：應進行生化培養(yǎng)與血清學實驗確定嗜肺軍團菌。生化培養(yǎng)：氧化酶（－/弱 ），硝酸鹽還原－，尿素酶－，明膠液化＋，水解馬尿酸。血清學實驗：用嗜肺軍團菌診斷血清進行分型。