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? ? ? ? ? ? ? ?目的 構(gòu)建載有小鼠抵抗素(resistin)基因及其反義核酸的重組真核表達(dá)質(zhì)粒,為下一步進(jìn)行resistin生物功能研究打基礎(chǔ).方法 用resistin基因mRNA編碼區(qū)序列特異引物,從小鼠脂肪組織中,通過(guò)RT-PCR的方法合成resistin cDNA,T4DNA連接酶將resistin cDNA克隆于pGEM-T栽體,經(jīng)雙酶切及測(cè)序鑒定克隆成功后再亞克隆于pcDNA3.1( )或pcDNA3.1(-)真核表達(dá)栽體,并測(cè)序鑒定.結(jié) 果 PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度與resistin cDNA理論長(zhǎng)度363 bp相符:重組pGEM-T被EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ內(nèi)切酶切為約3000 bp和355 bp兩個(gè)片段,測(cè)序結(jié)果表明插入pGEM-T的DNA片段的核苷酸序列與小鼠resisdn基因mRNA編碼區(qū)序列完全一致.重組pcDNA3.1( ) 和pcDNA3.1(-)測(cè)序結(jié)果表明插入的DNA片段分別與小鼠resistin基因mRNA編碼區(qū)序列和反義resistin基因mRNA編碼區(qū)核苷 酸序列一致.結(jié)論 成功克隆載有resistin基因和載有resistin基因反義核酸的重組真核表達(dá)質(zhì)粒.

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?心血管疾病作為當(dāng)今世界上患病率和死亡率最高的疾病,長(zhǎng)期以來(lái)受到研究人員的廣泛關(guān)注.而其中高血壓是心血管疾病最重要的危險(xiǎn)因素之一.許多臨床試驗(yàn)顯示,糖尿病患者較正常人群具有較高心血管疾病患病率.同時(shí)分子生物學(xué)研究也證實(shí),Ⅱ型糖尿病和心血管疾病之間存在著密切的聯(lián)系.抵抗素Resistin作為在胰島素抵抗發(fā)生過(guò)程中的重要脂肪因子,被發(fā)現(xiàn)在高血壓以及其他一些心血管疾病患者血清內(nèi)具有較高的水平,成為研究糖尿病和心血管疾病之間相互關(guān)系的重要因子之一.近些年越來(lái)越多的研究表明,Resistin同炎癥狀態(tài)下的動(dòng)脈粥樣硬化,胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下胰島素調(diào)節(jié)血管舒張能力受損以及內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂等等都有著密切的關(guān)系.但是關(guān)于Resistin同高血壓之間的關(guān)系以及相關(guān)的分子機(jī)理的直接研究并不是很多.本實(shí)驗(yàn)利用小鼠無(wú)創(chuàng)血壓儀對(duì)鼠尾血壓進(jìn)行測(cè)量證實(shí)Resistin連續(xù)處理6天可以引起小鼠體內(nèi)高血壓以及胰島素抵抗.隨后通過(guò)TLR4敲除模式小鼠,以及血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑培哚普利進(jìn)行小鼠灌胃,利用RT-PCR,ELISA,ChIP等實(shí)驗(yàn)技術(shù)對(duì)Resistin誘導(dǎo)小鼠高血壓的分子機(jī)理進(jìn)行探索.同時(shí)結(jié)合正常人群,糖尿病,高血壓以及糖尿病兼高血壓患者的血清檢驗(yàn)進(jìn)一步探討Resistin同糖尿病,高血壓之間的關(guān)系.

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