狂犬病毒（Rabies virus, RBV）抗體檢測試劑盒用于檢測貓、犬等動物血清中的狂犬病毒抗體，用于評估狂犬病毒疫苗免疫狀況。
本試劑盒采用阻斷ELISA法，在酶標板條微孔上預包被狂犬病毒抗原。在試驗中，加入稀釋后的待檢血清，經過溫育后，若樣品中含有狂犬病毒特異性抗體，則與包被板上的抗原結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后；再加入酶標的抗狂犬病毒單抗，樣本中的抗體阻斷了單抗與包被板上抗原的結合；經洗滌除去未結合的酶結合物；在微孔中加入TMB底物液，經酶催化產生的藍色信號與樣本中的抗體含量成反比，加入終止液終止反應后，用酶標儀450nm波長測定反應孔中的吸光度A值。
組份
1 | 抗原預包被板條 | 1/2塊 | 6 | 終止液 | 11ml |
2 | 酶結合物 | 11/22ml | 7 | 陰性對 照 | 1/2ml |
3 | 10倍濃縮洗滌液 | 100ml | 8 | 陽性對 照 | 0.5ml/1ml |
4 | 顯色液 | 11/22ml | 9 | 封板膜 | 2/4張 |
5 | 樣本稀釋液 | 100ml | 10 | 說明書 | 1份 |
需自備的設備及試劑
1.微量移液器：10μl-100μl、100μl-1000μl。
2.一次性移液器吸頭。
3.量筒：500ml。
4.96孔板酶標儀。
5.蒸餾水或去離子水。
6.洗瓶或洗板機。
樣品制備
取動物全血，按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。
洗滌液的準備
濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫，如有鹽結晶，搖動使結晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。
注意事項
1.試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫，應將試劑盒各組份放置室溫至少1小時以上。使用前應搖勻，使用后放回2-8℃。
2.不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時應防止試劑污染。
3.終止液對皮膚和眼可能有刺激性，使用時應該注意防護。
4.TMB（顯色液）不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。
5.檢測板拆封后應避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2-8℃)。
6.所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免污染。
7. 嚴格遵守操作說明可以獲得好的結果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確。
8.抗原包被板為一次性用品，不得重復使用；
操作步驟
1.每次試驗均設置陽性對照1孔、陰性對照2孔，陰、陽性對照不用稀釋，直接取100ul加入反應孔。
2.將樣品稀釋液按90ul/孔加入到微孔反應板內，之后將待檢樣品血清按10ul/孔加入孔內并吹打混勻（移液器槍頭請勿混用）；
3.蓋上封板膜（可按實際需要自行裁剪），置37℃溫育60分鐘。
4.小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul，后甩去孔內液體，以上步驟重復4-6次，然后在干凈吸水紙上拍干。
5.每孔加酶結合物100μl，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。
6.小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌4-6次, 方法同4。切記之后在干凈吸水紙上拍干。
7.每孔加顯色液100μl，混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘。
8.每孔加終止液50μl，使反應終止，10分鐘內測定結果。
結果判定
用酶標儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度OD值。
試驗成立的條件是：
陰性對照（N）OD值0.5，同時陽性對照(P)阻斷率50；
計算方法：
PI (阻斷率)= 1 —（樣品OD值 ÷ 陰性OD均值）
陰陽性判斷：
PI(阻斷率)40則判斷為陽性；
PI≤40則判斷為陰性。
注：（PI=40相當于抗體滴度0.5IU/ml）
有效期
貯存方法：2 - 8oC下貯存。
有效期：12個月。
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